Drechslera oryzae Subram. & Jain anamorfo de Cochliobolus miyabeanus (Ito and Kurib.) Drechs. es el causante de una de las principales enfermedades del arroz a nivel mundial: helminthosporiosis o brown spot (SEMPERE y SANTAMARINA, 2006a). Nigrospora oryzae (Berk. & Broome) Petch (telomorfo: Khuskia oryzae Huds.) es una de las especies más comunes en este cereal.

Conocer como interactúan estas especies y como se desarrollan en distintas condiciones medioambientales es fundamental para su posterior control. El objetivo de este trabajo, fue estudiar el efecto de la actividad de agua y la temperatura sobre el crecimiento conjunto de las especies, además de determinar su interacción al variar estos parámetros.

 

Materiales y métodos

Aislados y medio de cultivo

Las especies que se han utilizado en este trabajo, fueron aisladas en el laboratorio de Ecosistemas Agroforestales de la Escuela Técnica Superior del Medio Rural y Enología de muestras de granos de arroz de distintas parcelas y cooperativas de las principales zonas productoras de la provincia de Valencia.

Se utilizó Agar Extracto de Arroz (AEA) como medio base. Para ajustar la actividad de agua, se añadieron distintas cantidades de glicerol y agua destilada (SEMPERE y SANTAMARINA, 2006a). En total se realizaron 10 tratamientos combinando 5 actividades de agua (0,85, 0,90, 0,95, 0,98, 0,995) y dos temperaturas (15 y 25ºC).

En cada una de las placas se inocularon dos discos, uno de D. oryzae y otro de N. oryzae, separados por una distancia de 45 mm, obtenidos de la periferia de colonias puras de dichas especies crecidas en Agar Patata Dextrosa (PDA) a 25ºC durante cinco días.

El crecimiento fue registrado diariamente mediante la medición por colonia fúngica de dos diámetros perpendiculares, durante 5 días a intervalos de 24 horas.

Para calcular la ratio de crecimiento (mm·día-1) se realizó una regresión lineal de los radios (mm) frente al tiempo (días). El programa utilizado fue Microsoft Excel 2003.

Para mantener la actividad de agua durante el tiempo del experimento, placas con el mismo valor fueron puestas en cajas de polietileno conteniendo soluciones con la actividad de agua respectiva. Esta se comprobó en todo momento, utilizado un Aqualab (Decagon, Inc., Pullman, WA, USA).

 

Determinación del Índice de Dominancia (ID)

Después de establecer las ratios de crecimiento, las placas se dejaron durante 8 semanas, observando en todo momento su evolución macroscópica y estableciendo el tipo de interacción según el método descrito por Magan y Lacey (1984). Al final de este periodo, cada hongo recibió un valor numérico para obtener el Índice de Dominancia: crecimiento en común (1); inhibición mutua por contacto o con espacio entre colonias < 2 mm (2); inhibición mutua a distancia (3); inhibición de un microorganismo por contacto (4 para la especie dominante, 0 para la especie inhibida); inhibición de un microorganismo a distancia (5 para la especie dominante, 0 para la especie inhibida).

 

Análisis estadístico

Para verificar la influencia de los factores actividad de agua (aw ), temperatura (Tª) y especie (E), así como su interacción sobre el crecimiento fúngico dual, se realizó el test de análisis de la varianza (ANOVA) con valores de significación de P? 0,01. El programa utilizado fue STATGRAPHICS Plus 5.0 (Stat Point, Inc., Rendón, Virginia, EE UU).

 

Resultados y discusión

Efecto de la actividad de agua y la temperatura sobre el crecimiento dual

Tanto D. oryzae como N. oryzae registraron un máximo crecimiento a 0,995 y 25ºC. Durante los primeros cincos días de experimentación, D. oryzae creció a 0,95, 0,98, 0,995 a ambas temperaturas y N. oryzae lo hizo además para la actividad de agua de 0,90 (Figura 1).

El crecimiento de ambos hongos filamentosos durante los primeros cinco días fue muy similar que cuando lo hicieron individualmente (SEMPERE y SANTAMARINA, 2006a, b).

Dentro de una misma temperatura, las ratios de crecimiento registradas fueron menores a medida que descendió el valor de la actividad de agua, no observándose una variación en el tamaño del inóculo a 0,85 aw al final de las ocho de experimentación.

Nigrospora oryzae creció más en todas las condiciones ensayadas. Las diferencias entre las ratios de crecimiento entre los dos hongos filamentosos dentro de una misma actividad de agua, fueron más acentuadas a 25 que a 15ºC (Figura 1).

Todos los factores simples analizados y sus interacciones tuvieron un efecto significativo (P? 0,01) sobre el crecimiento medio de D. oryzae y N. oryzae crecidas conjuntamente, salvo (TªxE) que registró su significancia para P?0,05. (Tabla 1).

 

Interacciones

A las diferentes temperaturas y actividades de agua ensayadas, se produjo una variación en el tipo de interacción. A 0,995 aw y a ambas temperaturas y a 0,98 aw 25ºC, D. oryzae inhibió por contacto a N. oryzae. Sin embargo a 0,98 y 0,95 aw a 15ºC sucedió lo contrario ya que N. oryzae inhibió por contacto a D. oryzae. A 0,95 aw y 25ºC hubo un crecimiento en común, es decir contactaron las especies y ambas siguieron creciendo por el espacio ya colonizado por la otra cepa (Figura 2).

La variación de la interacción entre especies fúngicas en distintas condiciones medioambientales se ha observado en otras cepas. Así Santamarina y col. (2003) registraron este cambio al interaccionar Penicilium oxallicum y distintas especies de Fusarium cuando modificaron la actividad de agua y la temperatura.

Magan y col. (2003) sin embargo, observaron este hecho en el crecimiento dual de distintas especies fúngicas cuando variaron la temperatura. En este sentido, Marín y col. (1998) concluyeron que el tipo de interacción y el índice de dominancia son dependientes de condiciones medioambientales como la actividad de agua y la temperatura.

Según el valor del Índice de Dominancia obtenido, a 25ºC D. oryzae fue una especie dominante sobre N. oryzae, mientras que a 15ºC lo fue N. oryzae (Tabla 2).

 

BIBLIOGRAFÍA

MAGAN, N.; HOPE, R.; CAIRNS, V.; ALDRED, D. (2003) Post-harvest fungal ecology: Impact of fungal growth and mycotoxin accumulation in stored grain. European Journal of Plant Pathology 109, 723?730.

MAGAN, N.; LACEY, J. (1984) The effect of water activity, temperature and substrate on interactions between field and storage fungi. Transactions of the British Mycological Society 82, 83?93.

MARÍN, S.; COMPANYS, E.; SÁNCHIS, V.; RÁMOS, A.J. (1998) Effect of water activity and temperature on competing abilities of common maize fungi. Mycological Research 120, 959-964.

SANTAMARINA, M.P.; ROSELLÓ, J.; BARCELÓ, S.; MARÍN, S. (2003) Efecto de la actividad de agua y de la temperatura sobre el comportamiento de Penicillium oxalicum frente a Fusarium oxysporum. Revista Iberoamericana de Micología 20, 154-159.

SEMPERE, F.; SANTAMARINA, P. (2006a) Ecofisiología de Drechslera oryzae Subram. & Jain en condiciones in vitro. PHYTOMA 178, 49-50.

SEMPERE, F.; SANTAMARINA, P. (2006b) Microscopic and macroscopic study of the interaction between Alternaria alternata (Fr.) Keissler and Nigrospora oryzae (Berk. & Broome) Petch. Annals of Microbiology 56 (2), 101-107.

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